第２日目は、
『スフェロイドからＲＮＡを取り出し、ＤＮＡの逆転写』をしました。
今回は一般的とされているＲＴ－ＰＣＲ法で行いました。
＜ＲＴ－ＰＣＲの原理＞
逆転写酵素を使用してＲＮＡを１本鎖ｃＤＮＡに転写します。
その後、ｃＤＮＡ増幅のためＤＮＡポリメラーゼを使用します。
ＲＴ－ＰＣＲには主に、
ワンステップ操作（逆転写と増幅が１つのチューブ内で連続的に行われる）、
またはツーステップ操作（逆転写と増幅が別々のチューブ内で行われる）の２つがあります。
今回の手順は、
①スピンダウン
②スピンカラムを用いたＲＮＡ抽出
③メンプレン上でのDNase処理
④ＲＮＡの溶出
⑤逆転写反応によるcDNA合成と、real-timePCR法による発現量の解析
を行います。
今回はかなりの時間がかかってしまいました。
慣れない作業のせいか、細胞を取り出すのだけで一苦労。
結局、全行程を行う事が出来ずにこの日は終わってしまいました。
先生、ＴＡの方すみません。。
次回からはきちんと予習もして、せめてやらせていただいてる事位は
しっかり出来るようにしていきたいと思いました。
岩手県立一関第一高等学校
小野寺美咲
↓↓ここからは個人的な反省です↓↓
大学院の研究室は二回目と言えどもかなりの緊張・・・
長時間の作業に途中集中力が途切れてしまったことがありました。。
これは今後の課題です。
いくら理解するのが難しいとはいえ、
大学の先生や生徒の皆さんが分かりやすく
噛み砕いて説明をしてくれているのにも関わらず、
＜科学を学びたい＞と思って
自ら志願し東北大学におじゃましている私が
このような状態で受講していては駄目だと思いました。
ＴＡの方や先生に失礼ですし、他の受講生にも失礼だと反省しました。
改めて自分の置かれている立場や状況、
沢山の周りの方々の支援を知る事が出来、
自分がいかに恵まれているかをとても感じることが出来ました。
次回は３週間後となってしまいますが、
心機一転頑張りたいと思います。
